ELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的固相酶免疫测定方法，广泛应用于生物医学领域的抗原和抗体的检测。其基本步骤如下：首先，将已知的抗体或抗原固定于特定的固相载体上，同时保留其免疫活性。然后在检测过程中，将待测样本与酶标抗原或抗体依次反应，并通过洗涤分离出抗原-抗体复合物和游离成分。最后，加入酶底物以催化显色，从而进行定性或定量分析。

ELISA的主要目的是为实验提供准确的依据。为了确保实验数据的可靠性，在实验过程中应严格遵循全面的质量控制程序，并在标本采集前制定完整的计划。

血清是ELISA试剂盒中常用的标本，血浆也通常被视为与血清等同的标本。然而，因标本中的干扰物质可能引起假阳性或假阴性结果，这些干扰物质可分为内源性物质和外源性物质两种。

1. 内源性物质

研究发现，大约40%的血清标本中可能存在非特异性干扰成分，常见的干扰物质包括类风湿因子、补体、嗜异性抗体、自身抗体及其他物质。如类风湿因子（RF）可直接与ELISA系统中的捕捉抗体结合，导致假阳性。解决这一问题的方法包括：

• 使用F(ab)2替代完整的IgG。
• 用热变性处理血清样本。
• 在样本稀释液中加入还原剂以降解RF。

2. 外源性物质

外源性物质通常源于样本的采集和储存过程，例如溶血、污染、长时间保存及不完全凝固等问题。

• 标本溶血： 溶血会释放具有过氧化酶活性的血红蛋白，导致ELISA中出现非特异性显色。
• 细菌污染： 为避免样本被细菌污染，采集和处理时应格外小心。
• 不当储存： 样本应尽快于4℃保存，避免长时间放置。
• 凝集不全： 样本在分离前应充分凝固，以防形成可见纤维蛋白块。
• 添加剂影响： 抗凝剂和酶抑制剂可能对ELISA测定结果产生干扰。

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