俄罗斯专享会284的客户常常问,为什么我收到的产品是空管?这款产品为冻干粉形式,因其微量特点不易观察。使用前,请瞬时离心并添加适当溶剂进行溶解后再使用。
在进行细胞骨架的鬼笔环肽染色时,能否使用甲醇固定细胞呢?甲醇会损伤Actin蛋白,因此不应使用含有甲醇的固定液,建议使用不含甲醇的甲醛。
有用户提出,使用鬼笔环肽结合F-actin标记石蜡切片时为何没有观察到信号?当细胞和组织经过二甲苯或丙酮等溶剂处理(例如,在脱石蜡的过程中),这些溶剂会阻碍鬼笔环肽与F-actin的结合。此时,推荐使用通常不需要有机溶剂清洗的冷冻切片,或者采用抗肌动蛋白抗体作为替代方案。
关于探针的浓度,建议根据产品说明书中的稀释比例进行使用,具体浓度信息可能不明确。若在进行F-Actin的鬼笔环肽染色时,部分样本有染色而部分则无,且染色信号较弱,您可以尝试以下措施:(1)增加染料浓度或延长孵育时间;(2)确认所用波长是否适合,并重新检查过滤器设置的正确性。
那么,如果不进行透化步骤,鬼笔环肽能否直接染色固定后的细胞?事实上,荧光标记的phalloidins仅能在固定透化后的组织切片、细胞培养和无细胞实验中染色F-actin,因此您需要注意这一点。
若染色后没有荧光信号,应检查工作液及储液的配制是否正确。此外,固定和透化步骤至关重要,建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定,再使用新鲜的0.5% TritonX-100进行透化,并持续摸索最佳的固定及透化时间。同时,找到适合的染色工作液浓度及染色时间,以提高实验的成功率。
关于流式细胞术的应用,该产品主要用于微丝的染色,通常使用荧光显微镜观察,不推荐用于流式细胞检测。同样,普通的荧光显微镜也是可以进行观察的,但激光共聚焦显微镜的拍摄效果则更佳。
最后,有关鬼笔环肽染料的重复使用,通常情况下,染色液在使用后可能会影响后续染色效果,因此最好不重复使用。我们的俄罗斯专享会284鬼笔环肽,在按照说明书添加时,浓度较低,这也就是为何不建议重复使用的原因。