胎牛血清的常规储存温度为-20℃，若需长期保存，建议在-80℃下保存。解冻时不建议直接置于常温（25-37℃）中，以免产生絮状沉淀，影响血清的品质。推荐的解冻方法是先将血清从-20/-80℃转移至4℃，待其完全化冻后，再从4℃转移至室温。在整个解冻过程中，应持续轻轻摇动，以保证血清成分和温度均匀混合，减少沉淀的生成。解冻后，可将血清分装至15mL或50mL的无菌离心管中进行冻存，也可根据使用频率在4℃下储存一管已解冻的血清，以便于频繁配制培养基，但在4℃下存放时间不宜过长，最好在一个月内使用完毕。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下长时间保存，以防其中重要的细胞生长因子失活而影响细胞状态。

原则上，血清的添加量应控制在5%、10%或20%之间。大多数细胞的正常培养使用10%血清，而部分细胞在原代提取时可使用20%的血清。每种细胞适应的血清浓度需根据其特性和实验目的进行探索。这涉及到热灭活的概念，热灭活通常是在56℃下处理已解冻血清30分钟，能够使补体去活化。补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺释放、增强吞噬作用及淋巴细胞与巨噬细胞的趋化激活。对于常规细胞培养，热灭活通常并非必需步骤，经过此处理的血清对细胞生长的促进作用微小，甚至可能因高温处理降低血清质量，影响细胞生长速率并增加沉淀物。

在细胞培养中，研究人员可能会面临更换血清的情况。如果直接将新血清制成的培养基用于细胞培养，可能会导致先前生长良好的细胞增殖速度降低或脱壁死亡。这通常是因为细胞已适应原培养环境，突如其来的营养变化，即使新血清品质更好，也可能导致细胞不适应。因此，建议在更换血清时遵循渐进替换的原则，以确保细胞能够顺利适应。首次更换液体时，建议按新旧血清1:3的比例进行，随后按1:1，再到3:1，最终完全替换。对于对培养环境敏感的细胞，需要进一步细化替换比例。

解冻后如发现有少量乳白色絮状或点状物质，主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后形成的纤维蛋白。这些絮状物质不会影响血清质量，可通过400×g离心5分钟获取上清，基本不会对细胞造成重大影响。一般情况下，厂家提供的血清为无菌，通常不需要额外过滤除菌。如发现悬浮物，可将其与培养液一起过滤，而不是直接过滤血清。

如果在细胞培养过程中发现黑点，应首先观察培养基是否混浊，黑点是否呈不规则游动。如果细胞被污染，微生物会大量繁殖，导致培养基迅速变黄、变混浊，污染可能包括细菌或支原体污染。如果在显微镜下观察到细胞生长状态良好且未发生明显变化，则黑点可能与下列因素相关：(1) 细胞生长过程中自然破碎后的残骸；(2) 血清中的杂蛋白，可能是反复冻融造成的；(3) 配制培养基的水或容器不合格。可通过离心或过滤方法去除黑点；(4) 原代细胞中的黑点可能是原代组织中的杂质，经多次传代可逐渐消除。

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