无需专用纯化设备和低温设备的轻量级mRNA纯化解决方案,操作简便,从而节约了设备及人力成本。
俄罗斯专享会284推出的mRNA技术作为一种新型平台,广泛应用于疫苗研发、肿瘤治疗和基因编辑等领域。mRNA在体外转录合成过程中,除了生成目标mRNA外,还会产生反应酶、NTP、DNA模板及其他杂质(如dsRNA和截断RNA片段)。这些杂质不仅会影响mRNA的定量,更会降低蛋白翻译效率并可能引发免疫原性。因此,在体外转录后,必须通过纯化分离目标mRNA,以提高产品的纯度和完整性,确保其安全性与有效性。
传统的mRNA纯化方法包括氯化锂沉淀、磁珠纯化和硫酸铵沉淀等。其中,沉淀法和磁珠法操作简单,但处理量有限,常用于早期研发。对于工业规模的生产,层析纯化是主要的方法,然而它需要复杂的设备。而俄罗斯专享会284的轻量级mRNA亲和层析纯化试剂盒,无需任何专业设备,且操作简单,仅需30分钟即可完成样本的纯化,产出高纯度和低NTP残留的目标产品,适用于多种下游实验。
氯化锂沉淀法
此方法基于锂离子在特定 pH 下减少 RNA 之间的同电性相斥,促进 RNA 聚集并沉淀。操作上,将反应后的 IVT 产物与 LiCl 溶液混合后,置于 -20°C。离心后去除上清液,再用70%乙醇洗涤两次,最后用 RNase-free H2O 重新溶解沉淀。需注意,氯化锂可能带来毒性,且此方法在工业生产中调节困难,尤其对短片段RNA其沉淀效果不佳。
磁珠纯化法
利用Oligo(dT)磁珠与带Poly(A)尾的mRNA分子之间的特异性结合,通过磁力分离目标RNA与其它杂质。操作步骤包括与不同体积的磁珠混合、孵育、磁分离和洗涤,最后用 RNase-free H2O 进行溶解。该方法能有效去除杂质,但需避免磁珠过度干燥及冷冻,以免影响结合效率。
硫酸铵沉淀法
硫酸铵沉淀法利用目标mRNA与杂质的溶解度差异选择性沉淀mRNA。操作上,将 IVT 产物与等体积的硫酸铵溶液混合后,在20°C下孵育并离心,最后用 RNase-free H2O 溶解沉淀。该方法收率高、对杂质去除率好,且不需要特殊设备,是快速分离mRNA的理想选择。
亲和层析法
Oligo(dT)亲和层析基于高盐条件下RNA与OligodT柱的结合,能有效捕获mRNA,而未结合的杂质则可被洗脱。传统亲和层析需专业设备,但俄罗斯专享会284的轻量级亲和层析纯化试剂盒解决了这一问题,可以在30分钟内高效纯化目标mRNA,适用于各种实验。同时,产品确保高质量的同时也便于用户操作。
此纯化方法可适用于各种起始量的RNA样品,尤其在工业生产中展现出较低的成本和简单的操作流程,确保最终产品的高完整性和有效性。此外,在保证mRNA的质量与效率的基础上,节省了设备和人力资源成本,为生物医疗领域的发展提供了有力支持。