01 dsRNA是mRNA原液质量控制的关键检测项。mRNA疫苗利用信使RNA（mRNA）的分子副本激发免疫反应，为一项重要的医疗技术。该疫苗由脂质纳米颗粒及其中封装的RNA组成，确保RNA链的保护并促进其细胞内吸收。由于新冠疫情，具备显著疗效、快速研发、低成本及高安全性的mRNA疫苗技术备受关注。mRNA的制备与转录是疫苗生产的关键环节，其质量直接决定了疫苗的临床效果。《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则》与《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》均指出需控制mRNA的相关杂质，包括5’非帽化RNA、双链RNA（dsRNA）、长链RNA和截短RNA等。其中，dsRNA（双链核糖核酸）在体外转录（IVT）过程中可能产生，以不同的方式形成副产物，影响mRNA的功能。

包裹在纳米脂质颗粒（LNP）中的mRNA通过胞吞与内体融合，在内体的酸性环境中释放到细胞质中，激活翻译。然而，内体中的dsRNA杂质被受体蛋白TLR3识别，激活后引发信号转导途径，促使I型干扰素及其他促炎性细胞因子的分泌。而细胞质中的dsRNA则通过RIG-1和MDA5被识别，进而上调干扰素表达。它们在RNA识别上的特异性不同，RIG-1主要监控dsRNA的5’末端，MDA5则依赖双链长度。这表明，dsRNA的免疫原性不仅会影响mRNA的翻译效率，同时在重复给药时可能导致药物效力降低。因此，mRNA疫苗生产过程中严格控制dsRNA含量是至关重要的，这要求生产厂商对其进行精确定量检测。

02 ELISA法更适合用于dsRNA定量检测。当前的dsRNA检测方法包括dot blot（免疫斑点）、ELISA（酶联免疫吸附实验）、HTRF（均相时间分辨荧光）与HPLC。根据USP《mRNA疫苗质量分析程序（草案指引）》第2版的推荐，dot blot和ELISA均可用于dsRNA检测。HPLC方法的分辨率和准确度在某些情况下不足。Dot blot法操作相对简单，但灵敏度不高。相较之下，ELISA作为一种成熟的免疫分析方法，其检测灵敏度可达到pg/mL级别，在医学实验、生物制药等领域广泛应用，其基本原理基于抗原与抗体的特异性反应。当前，ELISA和HTRF已开发成为商用试剂盒。HTRF结合了荧光共振能量转移（FRET）与时间分辨荧光（TRF）技术，操作简便，具有高稳定性和再现性，适用于高通量检测。

03 搭配四种修饰类型标准品的dsRNAELISA定量检测试剂盒具有稳定、准确、灵敏的特性。在开发过程中，标准品的制备和选择是解决的关键。尽管国外试剂盒使用polyI:C作为标准品，但由于抗体对其与dsRNA的识别差异，导致dsRNA定量不准确。因此，必须自主制备序列随机、高纯度的dsRNA标准品。mRNA疫苗的自免疫原性主要来自于残留的dsRNA和mRNA本身，这影响了mRNA的稳定性和效力。通过引入化学修饰的核苷酸可有效降低自免疫原性，相关研究获得了2023年诺贝尔生理医学奖。不同修饰类型的dsRNA在抗体识别上存在显著差异，因此搭配同类标准品更能保证定量的准确性。尽管抗体的识别受到序列碱基组成的影响，通过对抗体的筛选与浓度组合优化，可以最大程度降低这些因素对测值的干扰，确保检测结果的可靠性。

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